Zellkonzentrations-Rechner
Berechnen Sie Zellkonzentration, -dichte und -lebensfähigkeit für Zellkultur- und Forschungsanwendungen
Zählen Sie Zellen in 4 Eckquadraten (je 1mm²) für beste Genauigkeit
Geben Sie 2 für 1:1 Verdünnung, 10 für 1:9 Verdünnung usw. ein
Ergebnisse
Zellkonzentration verstehen
Die Zellkonzentration (auch Zelldichte genannt) ist die Anzahl der Zellen pro Volumeneinheit, typischerweise ausgedrückt als Zellen/mL. Eine genaue Messung der Zellkonzentration ist für Zellkultur, experimentelle Reproduzierbarkeit, Durchflusszytometrie und viele andere Anwendungen in der Zellbiologie unerlässlich.
Hämozytometer-Methode
Standardformel
Zellen/mL = (Gezählte Gesamtzellen / Anzahl der Quadrate) × Verdünnungsfaktor × 10⁴
Der Faktor 10⁴ ergibt sich aus den Spezifikationen der Hämozytometer-Kammer:
- Jedes große Quadrat = 1mm × 1mm = 1mm²
- Kammertiefe = 0,1mm
- Volumen pro großem Quadrat = 1mm² × 0,1mm = 0,1mm³ = 0,0001mL = 10⁻⁴ mL
- Daher mit 10⁴ multiplizieren, um in Zellen/mL umzurechnen
Mit Lebensfähigkeit (Trypanblau)
Gesamtkonzentration = [(Lebensfähige + Tote) / Quadrate] × Verdünnung × 10⁴
Lebensfähige Konzentration = (Lebensfähige Zellen / Quadrate) × Verdünnung × 10⁴
Lebensfähigkeit (%) = (Lebensfähige Zellen / Gesamtzellen) × 100
Typische Zellkonzentrationen
| Anwendung | Typischer Bereich | Hinweise |
|---|---|---|
| Zellkultur-Aussaat | 1×10⁴ - 1×10⁵ Zellen/mL | Abhängig von Zelltyp und Plattengröße |
| Exponentielle Wachstumsphase | 5×10⁵ - 2×10⁶ Zellen/mL | Optimal für die meisten Experimente |
| Durchflusszytometrie | 1×10⁶ - 1×10⁷ Zellen/mL | Höher für Sortierung |
| Kryokonservierung | 1×10⁶ - 1×10⁷ Zellen/mL | In 10% DMSO oder Serum |
| Bakterienkultur (E. coli) | 1×10⁸ - 1×10⁹ Zellen/mL | Stationäre Phase |
| Hefekultur | 1×10⁷ - 5×10⁷ Zellen/mL | Exponentielle Phase |
| Blut (Leukozyten) | 4×10⁶ - 1×10⁷ Zellen/mL | Physiologischer Bereich |
| Transfektion/Transduktion | 5×10⁵ - 2×10⁶ Zellen/mL | 70-90% Konfluenz |
Lebensfähigkeitsstandards
Ausgezeichnet (> 95%)
Ideal für alle Experimente, Zellbanken und therapeutische Anwendungen. Zellen sind gesund und teilen sich aktiv.
Gut (90-95%)
Akzeptabel für die meisten Experimente. Überwachen Sie die Kulturbedingungen und ziehen Sie eine baldige Subkultivierung in Betracht.
Grenzwertig (80-90%)
Suboptimal. Mit Vorsicht verwenden. Überprüfen Sie Kulturbedingungen, Medienqualität oder Kontamination.
Schlecht (< 80%)
Nicht für Experimente empfohlen. Sofort entsorgen oder Fehlersuche durchführen. Kann auf Kontamination oder gestresste Zellen hinweisen.
Best Practices beim Zählen
Probenvorbereitung
- • Mischen Sie die Zellsuspension vor der Probenahme gründlich
- • Stellen Sie eine Einzelzellsuspension sicher (keine Klumpen)
- • Bei Bedarf verdünnen, um 20-50 Zellen pro Quadrat zu erhalten
- • Arbeiten Sie schnell, um Absetzung zu verhindern
Zählregeln
- • Zählen Sie Zellen, die die oberen und linken Ränder berühren (einschließen)
- • Zählen Sie keine Zellen, die die unteren und rechten Ränder berühren (ausschließen)
- • Zählen Sie mindestens 4 Quadrate für statistische Genauigkeit
- • Streben Sie 100-400 insgesamt gezählte Zellen an
Qualitätskontrolle
- • Zählen Sie Duplikatproben für Genauigkeit
- • Überprüfen Sie, ob die Kammer vor dem Beladen sauber und trocken ist
- • Verwenden Sie das richtige Volumen (10µL für die meisten Kammern)
- • Zählen Sie innerhalb von 5 Minuten, um Absetzung/Verdunstung zu vermeiden
Alternative Zählmethoden
Automatische Zellzähler
Vorteile:
- • Schnell und reproduzierbar
- • Reduzierte Benutzerverfälschung
- • Größenverteilungsanalyse
Beispiele: Countess, TC20, Vi-CELL
Durchflusszytometrie
Vorteile:
- • Absolute Zählung mit Beads
- • Multiparameter-Analyse
- • Lebensfähigkeit mit Lebend/Tot-Färbungen
Am genauesten für komplexe Populationen
Spektrophotometrie (OD600)
Verwendung für:
- • Bakterienkulturen
- • Hefesuspensionen
- • Hochdurchsatz-Screening
Erfordert Kalibrierungskurve
Coulter-Zähler
Verwendung für:
- • Hochdurchsatz-Zählung
- • Partikelgrößenanalyse
- • Blutzellzählungen
Basiert auf elektrischer Impedanz
Häufige Anwendungen
- Zellkultur-Wartung: Bestimmen Sie die Aussaatdichte für Subkultivierung und Expansion
- Experimentelles Setup: Gewährleisten Sie konsistente Zellzahlen über Replikate und Bedingungen hinweg
- Durchflusszytometrie: Bereiten Sie Proben bei optimaler Konzentration für die Erfassung vor
- Medikamententests: Berechnen Sie IC50 und Dosis-Wirkungs-Kurven mit genauen Zellzahlen
- Transfektion: Optimieren Sie die Transfektionseffizienz mit geeigneter Zelldichte
- Zellbanken: Bereiten Sie Kryoröhrchen mit konsistenten lebensfähigen Zellzahlen vor
- Qualitätskontrolle: Überwachen Sie Kulturgesundheit und Kontamination
Fehlerbehebung
- Zellen zu dicht: Verdünnen Sie die Probe 1:2 oder 1:10 und multiplizieren Sie das Ergebnis mit dem Verdünnungsfaktor
- Zellen zu spärlich: Zählen Sie mehr Quadrate oder konzentrieren Sie die Probe durch Zentrifugation
- Klumpen vorhanden: Pipettieren Sie kräftiger oder verwenden Sie Trypsin/Dissoziationspuffer
- Niedrige Lebensfähigkeit: Überprüfen Sie Medienqualität, Temperatur, Kontamination oder Passagenzahl
- Inkonsistente Zählungen: Stellen Sie gründliches Mischen sicher und zählen Sie sofort nach dem Beladen
- Zellen setzen sich ab: Arbeiten Sie schnell; Trypanblau erhöht die Dichte und beschleunigt das Absetzen
Referenzen
- Strober, W. (2015). "Trypan Blue Exclusion Test of Cell Viability." Current Protocols in Immunology, 111, A3.B.1-A3.B.3.
- Cadena-Herrera, D., et al. (2015). "Validation of three viable-cell counting methods: Manual, semi-automated, and automated." Biotechnology Reports, 7, 9-16.
- Louis, K. S., & Siegel, A. C. (2011). "Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods." Methods in Molecular Biology, 740, 7-12.
- Phelan, M. C., & Lawler, G. (2001). "Cell counting." Current Protocols in Cytometry, Appendix 3, Appendix 3A.
- Chan, L. L., et al. (2013). "A novel image-based cytometry method for autophagy detection in living cells." Autophagy, 9(9), 1371-1382.
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