Calculadora de Concentración Celular
Calcule la concentración celular, densidad y viabilidad para aplicaciones de cultivo celular e investigación
Cuente células en 4 cuadrados de las esquinas (1mm² cada uno) para mejor precisión
Ingrese 2 para dilución 1:1, 10 para dilución 1:9, etc.
Resultados
Comprendiendo la Concentración Celular
La concentración celular (también llamada densidad celular) es el número de células por unidad de volumen, típicamente expresada como células/mL. La medición precisa de la concentración celular es esencial para el cultivo celular, la reproducibilidad experimental, la citometría de flujo y muchas otras aplicaciones en biología celular.
Método del Hemocitómetro
Fórmula Estándar
Células/mL = (Total de células contadas / Número de cuadrados) × Factor de dilución × 10⁴
El factor 10⁴ proviene de las especificaciones de la cámara del hemocitómetro:
- Cada cuadrado grande = 1mm × 1mm = 1mm²
- Profundidad de la cámara = 0.1mm
- Volumen por cuadrado grande = 1mm² × 0.1mm = 0.1mm³ = 0.0001mL = 10⁻⁴ mL
- Por lo tanto, multiplicar por 10⁴ para convertir a células/mL
Con Viabilidad (Azul Tripán)
Concentración Total = [(Viables + Muertas) / Cuadrados] × Dilución × 10⁴
Concentración Viable = (Células viables / Cuadrados) × Dilución × 10⁴
Viabilidad (%) = (Células viables / Células totales) × 100
Concentraciones Celulares Típicas
| Aplicación | Rango Típico | Notas |
|---|---|---|
| Siembra de cultivo celular | 1×10⁴ - 1×10⁵ células/mL | Depende del tipo celular y tamaño de placa |
| Fase de crecimiento exponencial | 5×10⁵ - 2×10⁶ células/mL | Óptimo para la mayoría de experimentos |
| Citometría de flujo | 1×10⁶ - 1×10⁷ células/mL | Mayor para separación celular |
| Criopreservación | 1×10⁶ - 1×10⁷ células/mL | En 10% DMSO o suero |
| Cultivo bacteriano (E. coli) | 1×10⁸ - 1×10⁹ células/mL | Fase estacionaria |
| Cultivo de levadura | 1×10⁷ - 5×10⁷ células/mL | Fase exponencial |
| Sangre (leucocitos) | 4×10⁶ - 1×10⁷ células/mL | Rango fisiológico |
| Transfección/transducción | 5×10⁵ - 2×10⁶ células/mL | 70-90% de confluencia |
Estándares de Viabilidad Celular
Excelente (> 95%)
Ideal para todos los experimentos, banco de células y aplicaciones terapéuticas. Las células están saludables y se dividen activamente.
Buena (90-95%)
Aceptable para la mayoría de experimentos. Monitoree las condiciones de cultivo y considere subcultivo pronto.
Marginal (80-90%)
Subóptima. Use con precaución. Investigue las condiciones de cultivo, calidad del medio o contaminación.
Pobre (< 80%)
No recomendado para experimentos. Descarte o solucione inmediatamente. Puede indicar contaminación o células estresadas.
Mejores Prácticas de Conteo
Preparación de Muestras
- • Mezcle bien la suspensión celular antes de tomar la muestra
- • Asegure una suspensión de células individuales (sin grumos)
- • Diluya si es necesario para obtener 20-50 células por cuadrado
- • Trabaje rápidamente para prevenir la sedimentación
Reglas de Conteo
- • Cuente células que tocan los bordes superior e izquierdo (incluir)
- • No cuente células que tocan los bordes inferior y derecho (excluir)
- • Cuente al menos 4 cuadrados para precisión estadística
- • Apunte a 100-400 células totales contadas
Control de Calidad
- • Cuente muestras duplicadas para precisión
- • Verifique que la cámara esté limpia y seca antes de cargar
- • Use el volumen apropiado (10µL para la mayoría de cámaras)
- • Cuente dentro de 5 minutos para evitar sedimentación/evaporación
Métodos Alternativos de Conteo
Contadores Celulares Automatizados
Ventajas:
- • Rápido y reproducible
- • Sesgo reducido del usuario
- • Análisis de distribución de tamaño
Ejemplos: Countess, TC20, Vi-CELL
Citometría de Flujo
Ventajas:
- • Conteo absoluto con perlas
- • Análisis multiparamétrico
- • Viabilidad con tinciones vivo/muerto
Más preciso para poblaciones complejas
Espectrofotometría (OD600)
Usar para:
- • Cultivos bacterianos
- • Suspensiones de levadura
- • Cribado de alto rendimiento
Requiere curva de calibración
Contador Coulter
Usar para:
- • Conteo de alto rendimiento
- • Análisis de tamaño de partículas
- • Conteos de células sanguíneas
Basado en impedancia eléctrica
Aplicaciones Comunes
- Mantenimiento de Cultivo Celular: Determinar la densidad de siembra para subcultivo y expansión
- Configuración Experimental: Asegurar números consistentes de células en réplicas y condiciones
- Citometría de Flujo: Preparar muestras a concentración óptima para adquisición
- Pruebas de Fármacos: Calcular IC50 y curvas dosis-respuesta con números precisos de células
- Transfección: Optimizar la eficiencia de transfección con densidad celular apropiada
- Banco de Células: Preparar crioviales con conteos consistentes de células viables
- Control de Calidad: Monitorear la salud del cultivo y contaminación
Solución de Problemas
- Células muy densas: Diluya la muestra 1:2 o 1:10 y multiplique el resultado por el factor de dilución
- Células muy dispersas: Cuente más cuadrados o concentre la muestra por centrifugación
- Grumos presentes: Pipetee más vigorosamente o use tripsina/buffer de disociación
- Baja viabilidad: Verifique la calidad del medio, temperatura, contaminación o número de pase
- Conteos inconsistentes: Asegure mezcla completa y cuente inmediatamente después de cargar
- Células sedimentándose: Trabaje rápidamente; el azul tripán aumenta la densidad y acelera la sedimentación
Referencias
- Strober, W. (2015). "Trypan Blue Exclusion Test of Cell Viability." Current Protocols in Immunology, 111, A3.B.1-A3.B.3.
- Cadena-Herrera, D., et al. (2015). "Validation of three viable-cell counting methods: Manual, semi-automated, and automated." Biotechnology Reports, 7, 9-16.
- Louis, K. S., & Siegel, A. C. (2011). "Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods." Methods in Molecular Biology, 740, 7-12.
- Phelan, M. C., & Lawler, G. (2001). "Cell counting." Current Protocols in Cytometry, Appendix 3, Appendix 3A.
- Chan, L. L., et al. (2013). "A novel image-based cytometry method for autophagy detection in living cells." Autophagy, 9(9), 1371-1382.
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